伏馬毒素B1時(shí)間分辨免疫熒光檢測(cè)試劑盒的研制

Development of TRFIA kit for quantitative analysis of fumonisin B1

目的:為快速檢測(cè)食品中的伏馬毒素B1（fumonisin B1,FB1）,制備抗FB1的單克隆抗體并利用該抗體研制基于時(shí)間分辨免疫熒光分析方法的檢測(cè)試劑盒。方法:在建立抗伏馬毒素B1單克隆雜交瘤細(xì)胞株的基礎(chǔ)上,采用小鼠腹腔注射法生產(chǎn)大量腹水,經(jīng)Protein A親和層析柱分離純化、透析后得到單克隆抗體,利用所得抗體建立間接競(jìng)爭(zhēng)性時(shí)間分辨免疫熒光分析試劑盒并優(yōu)化各參數(shù):線性范圍、檢出限及與黃曲霉毒素（aflatoxins,AFB1）、嘔吐毒素（deoxynivalenol,DON）和載體蛋白BSA等的交叉反應(yīng)性;對(duì)試劑盒穩(wěn)定性采用37℃破壞實(shí)驗(yàn);采用3個(gè)濃度的加標(biāo)回收試驗(yàn)確定回收率;對(duì)19份樣品及FB1玉米盲樣進(jìn)行檢測(cè),并同時(shí)用市售ELISA試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:所研制試劑盒的zui低檢出濃度為2ng/mL,檢測(cè)線性范圍為2～512ng/mL,線性方程2為Y=-0.644X+12.872（R=0.998）,50%抑制濃度為10.07ng/mL,加標(biāo)提取后,玉米樣品3個(gè)加標(biāo)水平的回收率在78.32%～116.76%之間,與AFB1、DON和BSA均無(wú)交叉反應(yīng)性,試劑盒常溫下可保存315d以上